對(duì)于NC膜的應(yīng)用技巧都在這里
更新時(shí)間：2021-09-14 | 點(diǎn)擊率：6768
酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane，簡(jiǎn)稱NC膜)，是蛋白印跡*泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，對(duì)蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學(xué)發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低，信噪比高。在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。NC膜是生物學(xué)試驗(yàn)中最重要的耗材之一。
NC膜的應(yīng)用技巧：
1. 蛋白與膜的結(jié)合原理
蛋白與膜的結(jié)合原理， 已知的結(jié)合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等，確切的結(jié)合原理并不明確，主要靠假說(shuō)來(lái)支撐。主要有兩種假說(shuō)：
1)首先兩者靠靜電作用力結(jié)合，然后靠H鍵和疏水作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。
2)首先兩者靠疏水作用結(jié)合，然后靠靜電作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。
兩條假說(shuō)，都表明其結(jié)合過(guò)程分為兩步，首先結(jié)合和后面長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。由于結(jié)合原理的不明確性，導(dǎo)致在這方面的工作非常依賴實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
2. 膜對(duì)結(jié)合的影響
1)膜孔徑
有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來(lái)區(qū)分不同的膜，但是請(qǐng)注意這只僅僅限于同一廠家的產(chǎn)品，如果是不同廠家的產(chǎn)品，這種比較是無(wú)意義的。
膜孔徑與層析速度的關(guān)系，已在上文描述。隨著膜孔徑減小，膜的實(shí)際可用表面積遞增，膜結(jié)合蛋白的量也遞增。估量表面積的參數(shù)為表面積比率(實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率)。另外，膜孔徑越小，層析速度也越小，那么金標(biāo)復(fù)合物通過(guò)T線的時(shí)間也就越長(zhǎng)，反應(yīng)也就越充分。
綜合以上兩點(diǎn)，結(jié)論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時(shí)也減慢了跑板速度，增加了非特異性結(jié)合的機(jī)會(huì)，也就是假陽(yáng)性越高.所以要按照試驗(yàn)結(jié)果挑選適合實(shí)際項(xiàng)目的膜，找到合適的平衡點(diǎn)。
上一篇： 看完本篇你就知道什么是中性蛋白酶了